Zmieniona ekspresja produktu genu reaktywiaka siatkówki w ludzkich mięsakach ad 5

Ponadto brak białka Rb w znacznej liczbie komórek we wszystkich nowotworach przerzutowych jest silnym dowodem na zaangażowanie tego białka w progresję mięsaków. Nasze dane wskazują na większą częstość zmian w poziomach Rb niż obserwowano w innych badaniach dotyczących ludzkich mięsaków, które zwykle obejmowały poszukiwanie zmian strukturalnych w samym genie Rb. 16 18 18 W jednej grupie 38 mięsaków 8 znaleziono mieć zmiany w genie Rb: 4 miało delecje pełnej długości, 3 miało częściowe delecje i brakowało transkryptów informacyjnego RNA (mRNA) pomimo obecności pozornie nienaruszonego genu Rb.16 Chociaż istniała sugestia, że niekorzystny wynik kliniczny był skorelowany z Nieprawidłowości genów Rb, liczba badanych nowotworów była zbyt mała, by można było mieć pewność co do tego wniosku. W innym badaniu z mięsakami głównymi heterozygotyczną utratę genu Rb obserwowano w 33 procentach z 69 guzów i nie było żadnego komentarza dotyczącego wyniku klinicznego.17 Przeciwciała poliklonalne przeciw produktowi genu Rb zastosowano w analizie kilku linii komórek mięsaka. 18 Trzy linie komórkowe nie wykazywały białka Rb immunoprecypitowanego, a jeden wykazywał pozornie normalny mRNA Rb. Zatem zarówno nienaruszony gen Rb, jak i normalny transkrypt mRNA dla mRNA są kompatybilne z utratą ekspresji produktu genu Rb.
Najbardziej czułą metodą wykrywania nieprawidłowości w ekspresji Rb jest sondowanie immunohistochemiczne dla samego produktu genu, co pozwala na ocenę poszczególnych komórek nowotworowych. Wysoka częstość nieprawidłowej ekspresji produktu genu Rb obserwowana w naszym badaniu mogła nie zostać wykryta na poziomie genetycznym, ponieważ zanieczyszczenie tkanki nowotworowej prawidłowymi komórkami może prowadzić do niedoszacowania stopnia nieprawidłowości genetycznych. Badania Western blotting na ekstraktach białkowych zamrożonej tkanki potwierdziły wyniki immunohistochemiczne i swoistość przeciwciała w sąsiadujących częściach guza. Takie potwierdzenie jest szczególnie ważne w ocenie dużych guzów, takich jak mięsaki, które mogą mieć bardzo niejednorodną strukturę komórkową.
Mierząc gęstość optyczną wybarwionych i nie wybarwionych komórek, ta metoda umożliwiła zarówno oznaczanie ilościowe produktu genu Rb w komórkach poszczególnych guzów, jak i wykrywanie niejednorodnych subpopulacji komórek pod względem ich zawartości białka Rb. Ilościowa analiza wyników immunohistochemicznych za pomocą analizatora obrazu, takiego jak CAS-200 (patrz Metody), daje niższy stopień subiektywności niż indywidualna interpretacja immunobarwienia. Ponieważ przeciwciało z białkiem Rb wykazywało intensywną reaktywność jądrową, było dobrym kandydatem do komputerowej analizy zawartości Rb. Jednak istotne było korelowanie wyników badania histologicznego z wynikami analizy obrazu, ponieważ białko Rb jest również wyrażane przez prawidłowe komórki. W związku z tym analizator obrazu był skupiony na komórkach śródbłonka i ogniskach limfocytów infiltrujących nowotwór, aby zapobiec niedoszacowaniu stopnia zmienionej ekspresji białka Rb.
Zdolność do określania rokowania poprzez pomiar białka Rb w mięsakach ma wpływ na leczenie tych nowotworów Pacjenci, u których nowotwory mają zmiany w ekspresji produktu genu Rb, mogą być kandydatami do terapii eksperymentalnej, ponieważ mają stosunkowo wysoką szansę na rozprzestrzenienie się raka i śmierci. Różnice w przeżyciu obserwowane w niniejszym badaniu nie dają się wytłumaczyć innymi czynnikami, o których wiadomo, że wpływają na wynik, takimi jak rozmiar guza, miejsce i podtyp histologiczny.24, 25 Potwierdzenie tych obserwacji przez innych badaczy uzasadniałoby zalecenia dotyczące terapii.
Finansowanie i ujawnianie informacji
Obsługiwane przez granty (CA-47179 [do Drs Brennan and Cordon-Cardo], CA-09501 [do Dr. Brennan] i CA-48534 [do Dr. Huanga]) z National Cancer Institute.
Jesteśmy wdzięczni V. Richon za pomoc w analizie Western blot; JG Lay (PharMingen) do charakteryzowania przeciwciał monoklonalnych; do T. Albino, V. De Vita, Z. Fuksa, P. Marksa i R. Rifkinda za krytyczną recenzję manuskryptu; do S. Hajdu w celu przeglądu materiału patologicznego; oraz C. Friedrich i S. Quinlivan w celu uzyskania danych klinicznych.
Author Affiliations
Od oddziałów chirurgii (WGC, MFB) i patologii (MED, CC-C), Memorial Sloan-Kettering Cancer Center w Nowym Jorku i PharMingen (C.-MH), San Diego, w Kalifornii Adres przedrukowany do Dr. Cordon-Cardo w Departamencie Patologii, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, Nowy Jork, NY 10021.

[podobne: womp rzeszów, marzena żaboklicka kurowska, fosforany bezpostaciowe w moczu ]